全自動(dòng)核酸純化儀純化核酸的步驟

更新時(shí)間：2021-08-05瀏覽：1040次

　　全自動(dòng)核酸純化儀選用磁棒吸附搬運(yùn)核酸純化方式，使用深孔反應(yīng)板和磁棒套，搭配不同品種的磁珠法核酸提取試劑，一起操作1-96個(gè)樣本，從血液、細(xì)胞、安排、病毒等多種樣本中自動(dòng)分離提取純化DNA/RNA。儀器經(jīng)過特制的磁棒吸附、搬運(yùn)和釋放磁珠，然后完結(jié)樣本/磁珠/核酸的搬運(yùn)，避免了液體處理進(jìn)程，提高了自動(dòng)化程度。

　　全自動(dòng)核酸純化儀在裂解液裂解樣本后，游離于裂解/結(jié)合液中的核酸被磁珠特異性吸附，經(jīng)過磁棒及磁棒套配合，完結(jié)磁吸、搬運(yùn)、釋放和混合等動(dòng)作使吸附核酸的磁珠與裂解/結(jié)合液分離，并在漂洗液孔將與磁珠非特異結(jié)合的各種雜質(zhì)去除，后使核酸分子溶解于洗脫液中。

　　全自動(dòng)核酸純化儀在分子克隆的所有操作中，基本的操作是核酸的純化。其關(guān)鍵過程是去蛋白質(zhì)，通常只要用酚/氯仿。氯仿抽提核酸的溶液即可。每當(dāng)需要把克隆有某一些所用的酶滅活或去除以便進(jìn)行下一步時(shí)，可進(jìn)行這種抽提。但是，如要從細(xì)胞裂解液等復(fù)雜的分子混合物中純化核酸，則要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白質(zhì)后，再用有機(jī)溶劑抽提。

　　這些蛋白酶包含鏈霉蛋白酶及蛋白酶K等，它們對(duì)多種天然蛋白均有活性，用酚氯仿抽提：這兩種有機(jī)溶劑合用，比單獨(dú)用酚抽提的除蛋白作用更佳。繼而用氯仿抽提則可除掉核酸制品中的痕量酚。

　　1.核酸樣品置有蓋小離心管中，加入等體積的酚/氯仿。

　　2.旋渦混勻管內(nèi)容物，使呈乳狀。

　　3.12000×g室溫離心15秒。

　　4.水相移入另一離心管，棄去兩相界面和有機(jī)相。

　　5.重復(fù)過程1-4步操作，直至兩相界面上見不到蛋白質(zhì)停止

　　6.按下述核酸濃縮法沉淀收回核酸。